Ko te hinu Saposhnikovia divaricata parakore mo te rama me te hopi ki te hanga i te tini o te hinu whakaraerae hinu hou mo nga kaitahu ahi kakaho.

whakaahuatanga poto:

 

2.1. Whakaritenga o SDE

I hokona nga rhizomes o SD hei otaota maroke mai i Hanherb Co. (Guri, Korea). Ko nga taonga tipu i whakamanahia e te Takuta Go-Ya Choi o te Korea Institute of Oriental Medicine (KIOM). He tauira putea (nama 2014 SDE-6) i tukuna ki te Korean Herbarium of Standard Herbal Resources. Ko nga rhizomes maroke o SD (320 g) i tangohia e rua ki te 70% te waihano (me te 2 h reflux) katahi ka kuhu te tangohanga i raro i te pehanga iti. Ka tātarihia te decoction, ka lyophilized, ka rongoa ki te 4°C. He 48.13% (w/w) te hua o te tangohanga whakamaroke mai i nga rauemi timatanga.

 

2.2. Ko te Ine-Mahi Nui o te Waa Chromatography (HPLC).

I mahia te tātaritanga Chromatographic me te punaha HPLC (Waters Co., Milford, MA, USA) me te kaitirotiro raupapa whakaahua. Mo te tātari HPLC mo te SDE,O-glucosylcimifugin paerewa i hokona mai i te Korea Whakatairanga Institute mo te Ahumahi rongoa tuku iho (Gyeongsan, Korea), mehekona-O-glucosylhamaudol me te 4′-O-β-D-glucosyl-5-OKo te -methylvisamminol i wehea i roto i ta maatau taiwhanga, ka tohua e nga tātaritanga matakite, na NMR me MS te nuinga.

Ko nga tauira SDE (0.1 mg) i rewa ki te 70% te waihano (10 mL). I mahia te wehenga Chromatographic me te pou XSelect HSS T3 C18 (4.6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). Ko te wahanga pūkoro ko te acetonitrile (A) me te 0.1% waikawa acetic i roto i te wai (B) i te rere-tere o te 1.0 mL/min. I whakamahia te hotaka rōnaki kaupae e whai ake nei: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min), me te 20–65% A (23–40 min). ). I karapahia te roangaru kitea i te 210-400 nm ka tuhia ki te 254 nm. Ko te rōrahi werohanga he 10.0μL. Ko nga otinga paerewa mo te whakatau i nga chromone e toru i whakaritea i te kuhanga whakamutunga o te 7.781 mg/mL (prim-O-glucosylcimifugin), 31.125 mg/mL (4′-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol), me te 31.125 mg/mL (hekona-O-glucosylhamaudol) i te methanol ka pupuri i te 4°C.

2.3. Te Aromātai o te Mahi Whakakore-InflammatoryIn Vitro

2.3.1. Te Ahurea Pūtau me te Mahinga Tauira

RAW 264.7 pūtau i riro mai i te American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) me te tipu i roto i te reo DMEM kei roto 1% antibiotic me 5.5% FBS. I whakakororiahia nga pūtau ki roto i te hau makuku o 5% CO2 i te 37°C. Hei whakaihiihi i nga ruma, ka whakakapihia te reo ki te reo DMEM hou, me te lipopolysaccharide (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) i te 1μI taapirihia te g/mL i te mea kaore he SDE (200, 400 raneiμg/mL) mo tetahi atu 24 haora.

2.3.2. Te Whakataunga o te Nitric Oxide (NO), Prostaglandin E2 (PGE2), Tumor Necrosis Factor-α(TNF-α), me te Whakaputa Interleukin-6 (IL-6).

I tukinotia nga pūtau ki te SDE me te whakaongaonga ki te LPS mo te 24 haora. KORE he whakaputanga i tātarihia ma te ine i te nitrite ma te whakamahi i te reagent Griess e ai ki tetahi rangahau o mua [12]. Te hunanga o nga cytokine inflammatory PGE2, TNF-α, me te IL-6 i whakatauhia ma te whakamahi i te kete ELISA (R&D system) i runga i nga tohutohu a te kaihanga. Ko nga paanga o te SDE mo te NO me te hanga cytokine i whakatauhia i te 540 nm ranei 450 nm ma te whakamahi i te Wallac EnVision™te panui moroiti (PerkinElmer).

2.4. Te Aromātai o te Mahi AntiosteoarthritisI roto i te Vivo

2.4.1. Kararehe

Ko nga kiore tane Sprague-Dawley (e 7 wiki te pakeke) i hokona mai i Samtako Inc. (Osan, Korea) ka noho i raro i nga tikanga whakahaere me te 12-h marama/pouri huringa i°C me% haumākū. I whakawhiwhia ki nga kiore he kai taiwhanga me te waiad libitum. Ko nga tikanga whakamatautau katoa i mahia i runga i nga tikanga a te National Institutes of Health (NIH) me te whakamanahia e te Komiti Tiaki Kararehe me te Whakamahi o te whare wananga o Daejeon (Daejeon, republika o Korea).

2.4.2. Te whakauru o te OA me te MIA i roto i nga Kiore

Ko nga kararehe i tohatohahia, ka tohaina ki nga roopu maimoatanga i mua i te timatanga o te ako (ia roopu). Wairewa MIA (3 mg/50μL o te 0.9% saline) i werohia tika ki roto i te waahi-a-roto o te turi matau i raro i te rewharewha i whakauruhia ki te ranunga o te ketamine me te xylazine. I wehea matapōkeretia nga kiore kia wha nga roopu: (1) te roopu tote me te kore he werohanga MIA, (2) te roopu MIA me te werohanga MIA, (3) te roopu SDE-whakaritea (200 mg / kg) me te wero MIA, me te (4) ) te indomethacin- (IM-) te roopu rongoa (2 mg/kg) me te werohanga MIA. Ko nga kiore i tukuna ma te waha me te SDE me te IM 1 wiki i mua i te werohanga MIA mo nga wiki e 4. Ko te inenga o te SDE me te IM i whakamahia i roto i tenei rangahau i ahu mai i era i mahi i nga rangahau o mua [10,13,14].

2.4.3. Nga Inenga o te Tohanga Taumaha Hindpaw

Whai muri i te whakaurunga OA, ka pakaru te toenga taketake o te kaha ki te kawe i te taumaha o nga hiku. I whakamahia he whakamatautau ngoikore (Linton instrumentation, Norfolk, UK) ki te arotake i nga huringa i roto i te paanui taumaha. He mea ata whakanoho nga kiore ki roto i te ruuma ine. Ko te kaha o te taumaha i mahia e te hiku o te hiku i te wa toharite mo te 3 s te wa. Ko te ōwehenga tohatoha taumaha i tatauhia e te whārite e whai ake nei: [taimaha i runga i te taha o muri matau/(taimaha i runga i te taha hiku matau + taumaha i te taha maui o muri)] × 100 [15].

2.4.4. Nga Inenga o te Serum Cytokine Taumata

Ko nga tauira toto i centrifuge i te 1,500 g mo te 10 min i te 4 ° C; katahi ka kohia te serum ka rongoa ki te −70°C kia whakamahia. Ko nga waahanga mo te IL-1β, IL-6, TNF-α, me te PGE2 i roto i te serum i whanganga ma te whakamahi i nga kete ELISA mai i nga R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) kia rite ki nga tohutohu a te kaihanga.

2.4.5. Wā-tūturu Ine Ine RT-PCR Analysis

Ko te RNA katoa i tangohia mai i te kiko hononga turi ma te whakamahi i te TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), whakamuri-tuhi ki te cDNA me te PCR-whakanuia ma te whakamahi i te kete TM One Step RT PCR me te SYBR matomato (Applied Biosystems). , Motu Nui, NY, USA). I mahia te PCR ine-wa-tuturu ma te whakamahi i te punaha Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Ko nga raupapa tuatahi me te raupapa rangahau e whakaatuhia ana i te Ripanga1. Ko nga tohu o nga tauira cDNA me te nui o te GAPDH cDNA i whakanuia ki te TaqMan® Universal PCR ranunga matua kei roto te DNA polymerase e ai ki nga tohutohu a te kaihanga (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). Ko nga tikanga PCR he 2 meneti i te 50 ° C, 10 meneti i te 94 ° C, 15 s i te 95 ° C, me te 1 meneti i te 60 ° C mo te 40 huringa. I whakatauhia te kukū o te ira i whäia ma te whakamahi i te tikanga whakatairite Ct (tau huringa paepae i te whiti i waenga i te papa whakakaha me te paepae), e ai ki nga tohutohu a te kaihanga.

Utu FOB:US $0.5 - 9,999 / Piece

Min.Ota Rahi:100 Piece/Pieces

Whakarato Kaha:10000 Piece/Pieces ia Marama